aav-k8凯发

       派真生物载体克隆提供基因编辑crispr系列载体定制，aav-crispr载体的敲除、修复共分为4种类别，分别是spcas9/spcas9hf（a、b系列）、sacas9/ sacas9hf（c、d系列）、aav-crispr基因激活（e系列）、nmcas9, ascpf1, lbcpf1（f、g、h系列），专门用于基因编辑动物体内实验。

基本描述

       客户只需要提供sgrna靶基因序列和选择派真生物载体库编号，由派真生物进行靶点设计、图谱制作和载体构建，若grna未经有效性验证，建议多选择2-3个候选靶点。

spcas9/spcas9hf（a、b系列）

       spcas9是第一个被鉴定的cirspr核酸酶，其pam为ngg，pam序列在基因中出现的频率，大约每8bp出现一次，基因长达4.2kb（详细介绍请参阅aav-crispr系统，第18页）。派真生物以小于300 bp的efs（ef1a短版本）启动子或minicmv启动子（180 bp）驱动spcas9，使序列总长度不超过 aav长度限制 5kb。

特点

• 使用经过优化的sgrna scaffold，能提高切割效率约40%spcas9hf: spcas9高保真度版本，大大减小脱靶现象，切割活性与野生型相比无显著降低；
• xa01为spcas9及sgrna表达盒处在同一载体的一体化载体。使用比u6启动子更小但活性并无显著减弱的h1启动子(100 bp)，因此能将sgrna的表达盒与spcas9放入同一载体；
• xa02为无sgrna表达盒的单独spcas9载体，可根据需要置换efs启动子成410 bp以下的启动子；
• xa03~xa27为u6-sgrna表达盒，带有efs或ef1或cag启动子驱动的mcherry、cre、mcherry-2a-cre、renillaluciferase-2a-cre、zsgreen、egfp、egfp-kash。

特点

• 使用了经优化的sgrna scaffold, 显著提高切割效率；
• c1/d1为cmv启动子的sacas9hf与sgrna表达盒一体化载体；
• c2/d2/c2xx/d2xx为无sgrna表达盒的单独sacas9/sacas9hf载体，可根据实验设计需要搭配不同的载体使用。

aav-crispr基因激活（e系列）

       在14-16 nt的短rna指导下，野生型spcas9能结合到靶序列dna上但不能切割与释放。此时，经过改造加入形成ms2 rna接头的sgrna骨架能结合ms2-p65-hsf1 转录激活成分，从而激活下游位置的基因转录。激活基因的转录水平能达1000倍以上。

       nmcas9 是跟spcas9有相似活性的短版本cas9，基因长度为3.3kb，由于识别更长的pam（nnnngatt），pam序列在基因中出现的频率，大约每128 bp中出现一次，靶序列长度为（21-23 nt)，理论脱靶率比spcas9低得多，ascpf1、lbcpf1拥有与 crispr-cas9不一样的特性：（1）更短小的sgrna骨架（2）识别含t量高的5’pam（3）靶标dna被切于远离pam的位置，且产生5个碱基突出的粘末端。

*如需其他类型启动子或骨架定制，请联系凯发k8国际首页的技术支持。