crispr/cas9文库基因筛选综合服务价格-k8凯发

技术背景

       在后基因组时代，基因芯片和二代测序技术可以高通量筛选不同样本间的差异基因，但无法有效判断差异基因的功能或基因与表型的关系。利用功能缺失（loss-of-function）或功能获得（gain-of-function）高通量筛选策略，可帮助研究者快速高效地筛选出在特定表型中发挥关键作用的基因，为深入了解疾病发生发展的机制和新药的开发提供重要思路。

       目前可用于高通量功能筛选的技术有rnai(rna干扰)、crisprko(crispr knock-out) 、crispra( crispr activation)和crispri(crispr interference)，每个技术都各有优缺点，可根据不同需要进行选择。其中crisprko同时覆盖编码基因和非编码基因，脱靶率低，技术成熟稳定，应用广泛。

crispr文库筛选原理及步骤

       针对待筛选基因中的每个基因设计sgrna，可获得覆盖全基因组的寡核酸（sgrna）文库，将所有sgrna构建到慢病毒载体上并包装慢病毒，以低moi值感染表达系统其它元件的细胞，可获得理论上每个细胞单基因功能缺失细胞库。通过特定表型或报告基因的筛选获得目的细胞，经高通量测序及分析即可获得与筛选条件高度相关的候选基因。


crispr文库筛选步骤（montalbano,a.et al,mmolecular cell 2017）

文库选择
 

文库名称	物种	覆盖范围	载体类型
gecko v2 human library	human	19,050个编码基因（每基因6条sgrna) 1864个mirna(每mirna 4条sgrna) 1000条control sgrna，共计122411条sgrna	慢病毒双载
crispr/cas9 sgrna定制文库	可选择	根据需要定制lncrna、细胞凋亡、细胞增殖、信号通路、核受体相关等文库	慢病毒单载或双载可选择

可选择筛选表型

1、细胞耐药筛选
2、细胞增殖筛选
3、细胞凋亡筛选
4、细胞信号通路筛选

文库应用

1、筛选表型相关关键基因或信号通路，研究表型调控机制。
2、筛选肿瘤治疗潜在靶点，研发新药。
3、筛选耐药或增敏基因，开发新的联合用药方案。

服务流程

          筛选表型及文库类型确认→sgrna文库合成并构建→sgrna文库慢病毒包装→病毒感染目的细胞→筛选感染阳性细胞→表型筛选→高通量测序分析并确定基因列表






 
         派致生物专注于基因编辑技术的开发与应用，并致力于为临床和基础研究人员提供专业、全面的crispr文库基因筛选定制服务。