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基因敲除小鼠

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中乔新舟
基因敲除小鼠
2013年1月份,美国两个实验室在《science》杂志发表了基于crispr-cas9技术在细胞系中进行基因敲除的新方法,一种全新的人工核酸内切酶clustered regularly interspaced short palindromic repeats (crispr)/crispr-associated(cas)9出现,它主要是基于细菌的一种获得性免疫系统改造而成,其特点是制作简单,作用效果高。

技术原理:
crispr/cas9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats)是一种广泛存在于细菌与古细菌中的,由rna介导的可遗传的获得性免疫系统,这种免疫系统为宿主细胞提供了对外源dna(如噬菌体质粒)的免疫功能。
此系统的工作原理 是crrna(crispr-derived rna)通过碱基配对与tracrrna (trans-activating rna)结合形成tracrrna/crrna复合物,次复合物引导核酸酶cas9蛋白在与crrna配对的序列靶位点剪切双链dna。而通过人工设计这两种rna,可以改造形成具有引导作用的sgrna (short guide rna),足以引导 cas9对dna的定点切割。中乔新舟 目前已经成功将此技术应用于大、小鼠基因ko/ki的模型制备,以及条件性敲除(loxp系统)模型的制备。

crispr/cas9技术特点:
1、可实现对靶基因多个位点或多个基因同时敲除;
2、可对基因进行定点修饰(tag、gfp、rfp、点突、条件性敲除);
3、试验周期短、价格低、效率高;
4、可应用于大、小鼠等。

联系人:中乔新舟

地址:上海

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