稳转细胞株构建/稳定细胞株/个性化基因修饰/单、多克隆细胞株价格-k8凯发

云舟生物提供高性价比且短周期的细胞稳转株构建服务。我们的技术团队拥有资深经验，可为您量身定做个性化基因修饰的细胞株。根据实验目的、修饰位点和细胞株，我们可采用化学转染、电转染或者病毒转导的方法引入所需的dna修饰。标准药筛过后，多克隆细胞群或者单克隆细胞株经传代、验证并交付您使用。所有使用细胞株均保证携带理想的基因型，无污染且经atcc标准认证。对于您的细胞稳转株，我们可以开展多种类型的表型分析和功能验证，保括细胞增殖、凋亡、迁移、细胞活力、细胞毒性等。

图2 huh-7细胞中crispr介导的单grna基因敲除。对细胞群进行sanger测序，显示crispr靶位点处的有效突变（序列痕迹分解推断97.6%的序列包含突变）。

图3 rnp法验证基因敲除效率。通过grna-cas9核糖核蛋白（rnp）方法获得纯合敲除突变。（a）编辑过的rnp复合物通过电转法导入靶细胞，分离单克隆细胞并筛选。使用pcr和sanger测序验证细胞的基因型。（b）本案例在小鼠结肠癌细胞中进行基因编辑。rnp通过电转进入细胞后，可以结合靶基因的两个位点以敲除一段长13 kbp的区域。p1-p4四条引物用于三个pcr反应以区分敲除和野生型克隆。（c）pcr结果验证了克隆1中的纯合敲除突变，并进一步在（d）靶基因测序结果中得到印证。

图2 crispr介导的ipsc基因敲入。通过电转法向ipsc中导入cas9/grna rnp复合物和供体载体，成功敲入ubc驱动表达的egfp（2432 bp）。（a）sanger测序确认egfp成功敲入靶位点。（b）基因型pcr分析四个敲入纯合子的单克隆。野生型（wt）靶点的长度为762 bp，敲入了egfp的靶点的长度为3194 bp。（c）显微镜下的成功敲入的细胞具有egfp荧光。（d）核型分析结果。（e）egfp敲入的ipsc中多能性标记物（nanog、oct4和sox2）的免疫荧光结果。

3. 点突变细胞稳转株

亮点：

• 超高点突变效率：使用我们设计的供体载体和基因递送方式，靶细胞的hdr率可达到50%。
• 非病毒基因递送方式：基于电转法的rnp实现高效基因递送且脱靶率低。
• 周期短：载体设计完成后的纯合子突变细胞从改造到交付快至18周。

案例分析

图3 在thp-1细胞中验证点突变效果。（a）sanger测序检测goi序列中的点突变。红色方框的位置是非同义突变，绿色方框的位置是同义突变。（b）对突变细胞（pm）和野生型细胞（wt）的靶位点pcr，pcr产物显示其长度相同，表明点突变没有引发序列结构性变异。

4. 基因过表达细胞稳转株

亮点：

• 转基因永久整合：慢病毒转导的转基因整合宿主细胞基因组，细胞传代多次后仍具有稳定的表达效果。
• 可转导多种靶细胞：基因转导采用的慢病毒的包膜蛋白为vsv-g，具备感染多种类型的哺乳动物细胞的能力。
• 周期短：载体设计完成后的细胞从改造到交付，快至9周。