基因敲除服务价格-k8凯发

crispr/cas（clustered regularly interspaced short palindromic repeats/cas）系统是目前被广泛运用的基因编辑系统，其原理是由crispr转录产生的grna介导cas核酸酶靶向目标序列，对序列进行切割。其中最常用的是靶向dna的crispr/cas9系统，此系统是由ii类crispr/cas系统改造而来，能够在植物、细菌、酵母、鱼类及哺乳动物等多种细胞中，进行有效的靶向编辑，具有操作简易、效率高、以及作用靶位点多等优势。

crispr/cas9系统中sgrna(short guide rna)识别并结合目标基因的靶向序列，引导cas9对结合位点进行剪切，产生dna双链断裂（double-strand break, dsb），机体自身通过非同源重组（non-homologous end joining，nhej）的方式修复dsb，参与修复的蛋白经常会在dna末端插入或删除几个碱基，修复后的基因由于产生突变而导致功能丧失，从而实现机体内的基因敲除。

 

crispr/cas9系统介导的基因编辑（wiles m v et al. mammalian genome, 2015）
 

应用

1. crispr/cas9基因敲除细胞系建立

2. crispr/cas9基因敲除建立动物疾病模型
 

技术优势

1. 操作简易：仅需cas9核酸酶和sgrna即可对目标基因靶位点进行切割；

2. 效率高：在基因组水平上编辑目标基因，高度模拟目标模型，可精确编辑基因组；

3. 作用靶位点多：可实现多个靶基因位点及多个基因的同时敲除；

4. 提供多种基因编辑病毒工具：aav、lv；

5. 提供bsl-1和bsl-2病毒注射及实验操作平台；

6. 全面的实验凯发k8国际首页的技术支持。
 

服务内容

1. sgrna的设计；

2. 细胞内sgrna剪切活性筛选；

3. 敲除载体的构建；

4. 依据所要编辑的细胞选择cas9和sgrna不同导入方式：
    a、脂质体易转染细胞：使用质粒系统（cas9和sgrna）；
    b、 脂质体难转染细胞：使用质粒系统电转化、慢病毒或腺相关病毒感染（cas9和sgrna）；

5. 筛选基因敲除单克隆细胞系。
 

服务流程

客户提供

1. 目的基因基因序列（序列/id）以及物种来源；

2. 需介导基因敲除的细胞（可选）；

3. 病毒类型选择以及要求；

4. 血清型选择。
 

服务信息及最终交付内容、产品

 

流程分布	周期 (工作日)	交付内容	交付产品
sgrna序列的设计	2-4周	sgrna设计分析报告	-
sgrna的活性筛选		获得有活性的sgrna及筛选报告
基因敲除质粒的构建	1周	基因敲除质粒报告	基因敲除质粒
病毒包装	3周	病毒包装报告	高纯度病毒
单克隆细胞分选	8周	单克隆细胞分选及检测结果报告	基因敲除单克隆细胞系

声明：枢密科技提供的所有基因编辑服务及该服务的后续研究，仅适用在国家法律和伦理规范的范围内实施。禁止用于任何人体或临床实验的研究；禁止用于对人类生殖体系进行基因修饰的研究；禁止将基因修饰的其他动物胚胎及生殖细胞植入人体。客户如违反相关法律规定，本公司不承担任何法律责任。

案例展示

haoyi wang等人研究发现，crispr / cas介导的基因编辑允许高效地同时破坏小鼠胚胎干（es）细胞中的五个基因（tet1，2，3，sry，uty-8等位基因），通过nhej引入多个随机indel的靶向突变。将靶向tet1和tet2的cas9 mrna和sgrna共注射到受精卵中，在两种基因中产生具有双等位基因突变的小鼠，效率为80％。crispr / cas系统允许一步产生携带多个基因突变的动物，这种方法将大大加速功能冗余基因和上位基因相互作用的体内研究。

小鼠胚胎干细胞的多基因敲除（wang h et al. cell, 2013）

小鼠和小鼠胚胎干细胞的多基因编辑（wang h et al. cell, 2013）

参考文献

1. wiles m v , qin w , cheng a w , et al. crispr–cas9-mediated genome editing and guide rna design[j]. mammalian genome, 2015, 26(9-10).

2. wang h , yang h , shivalila c , et al. one-step generation of mice carrying mutations in multiple genes by crispr/cas-mediated genome engineering[j]. cell, 2013, 153(4):910-918.